Diseño del procedimiento Esta etapa, previa al proceso de valida-ción, condiciona en gran medida el re-sultado de la misma. El laboratorio or-ganizador, tras estudiar la información aportada por el fabricante o distribuidor del método alternativo, tiene que defi-nir, entre otros, el método de referencia, las categoría de alimentos en las que se realizarán los análisis y las cepas con las que se van a llevar a cabo los diferentes estudios. Previamente al comienzo de los estudios de validación, el diseño del procedimiento debe ser validado por la entidad de certificación. Estudio comparativo Esta fase consiste en la realización de un estudio comparativo de los dos mé-todos, referencia y alternativo, enfren-tando los resultados obtenidos en el análisis de las muestras mediante am-bos métodos. En el estudio compara-tivo se someten a ensayo un gran nú-mero de muestras, de diferentes cate-gorías de alimentos y con diferentes niveles de contaminación, tanto por el método de referencia como por el método alternativo. El laboratorio organizador realiza los ensayos necesarios empleando, pre-ferentemente, muestras naturalmen-te contaminadas. En el caso de que no fuera posible, se utilizan muestras contaminadas artificialmente con ce-pas a las que se ha sometido a un es-trés previo. Las pruebas y estudios en esta etapa varían de acuerdo con el ti-po de método que hay que validar: cualitativo o cuantitativo. En los mé-todos cualitativos el estudio com-parativo se centra en la determina-ción de los valores de eficacia relati-va, especificidad relativa, sensibilidad relativa, nivel de detec-ción relativa, inclusividad y exclusividad. En el caso de los métodos cuantitati-vos, los parámetros que hay que estudiar son la linealidad, exactitud, límites de detección y cuantificación, sensibilidad relativa, especificidad y selectividad. Estudio interlaboratorio Los objetivos principales de este es-tudio son determinar la variabilidad de los resultados obtenidos por di-ferentes laboratorios cuando anali-zan muestras idénticas y comparar estos resultados con los obtenidos en el estudio comparativo de los mé-todos. También permite determinar las características de funcionamiento comparativo de un método alterna-tivo respecto al método de referen-cia. El laboratorio organizador es el responsable de la puesta en marcha del ejercicio interlaboratorio, tenien-do en cuenta las directrices indicadas en el Anexo H de la Norma UNE-EN ISO 16140:2003/A1 Microbiología de los alimentos para consumo humano y animal. Protocolo de validación de métodos alternativos. Modificación 1 para la organización y ejecución de los estudios colaborativos. Para la realización del estudio se emplea un producto alimenticio de una de las categorías de alimentos vali-dadas. De forma general, las muestras se contaminaran artificialmente, ase-gurándose previamente de la ausencia del analito diana en la muestra. Tanto la muestra como el inóculo con el mi-croorganismo diana deben ser homo-géneos y permanecer estables durante el proceso de transporte y la duración de los análisis. Los laboratorios participantes en el ejercicio, y en particular los técnicos que realicen los ensayos, deben te-ner experiencia suficiente en la rea-lización de los análisis mediante el método de referencia. Previamente al inicio del ejercicio es imprescindi-ble realizar una correcta formación en el método alternativo, permitien-do que los laboratorios se familiaricen con el procedimiento de ensayo y con los equipos que deberán emplear posteriormente en el ejercicio. Es ne-cesario que al menos 10 laboratorios El Reglamento 2073/2005 establece la autorización de métodos alternativos si, por ejemplo, están certificados según la Norma EN-ISO 16140 AENOR 36 AENOR LABORATORIO
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